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高效液相色譜儀的正確使用與維護(hù)

點(diǎn)擊次數(shù):2435  更新時(shí)間:2020-02-20
  色譜柱的使用和保養(yǎng)
 
  色譜柱是高效液相色譜儀主要的部件,被測(cè)物質(zhì)能否被很好的分離和測(cè)定,色譜柱的性能起著決定性的作用。因此,在日常工作中,應(yīng)特別注意色譜柱的正確使用和維修保養(yǎng),以延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命。
 
  1、使用預(yù)柱和保護(hù)柱。預(yù)柱(pre-column)安裝于泵和進(jìn)樣器之間,它給色譜柱中的流動(dòng)相提供了*的平衡,并防止了對(duì)柱填料有破壞作用的組分或污染物進(jìn)入色譜柱。保護(hù)柱(guardcolumn)可以阻擋能夠牢固地吸附于色譜柱上的組分進(jìn)入色譜柱,保護(hù)柱應(yīng)與色譜柱的填料相同。預(yù)柱和保護(hù)柱可以經(jīng)常更換,而不需要經(jīng)常更換色譜柱,這就延長(zhǎng)了色譜柱的使用壽命。
 
  2、防止氣體進(jìn)入色譜柱。有些色譜柱(如凝膠柱)是不允許氣泡進(jìn)入的,否則將會(huì)使柱效降低甚至形成微小的難以驅(qū)除的氣室。因此,為了防止氣泡進(jìn)入色譜柱,一定要使用經(jīng)過(guò)脫氣的流動(dòng)相,并且要嚴(yán)格按照下列步驟來(lái)安裝色譜柱。a.拆卸下色譜柱入口處的密封螺絲,觀察是否有溶劑滲出;b.如有溶劑滲出,即可將色譜柱接到管路上,以避免氣泡的進(jìn)入;c.如無(wú)溶劑滲出時(shí),表明色譜柱的此端已經(jīng)進(jìn)去空氣了,此時(shí),可將色譜柱的出口端接到進(jìn)樣閥上,以流動(dòng)相來(lái)反方向沖洗色譜柱,以便將柱內(nèi)的空氣排除。較好以0.2ml/min的小流量來(lái)沖色譜柱,如果溶劑的流速太快或者是壓力突然的上升都將會(huì)導(dǎo)致柱性能的降低;d.如果流出的溶劑里不含有氣泡,說(shuō)明柱內(nèi)的氣體已經(jīng)被排出了,再將色譜柱以正確的方向接好,這樣氣泡就進(jìn)不到色譜柱里面了。
 
  3、色譜柱的清洗。為了不使被測(cè)物質(zhì)和雜質(zhì)停留在色譜柱中,在每次的樣品分析工作完成之后,都應(yīng)及時(shí)地清洗色譜柱。首先要用對(duì)被測(cè)樣品洗脫能力強(qiáng)的溶劑來(lái)洗脫色譜柱,如果流動(dòng)相是緩沖溶液,則應(yīng)先用蒸餾水來(lái)沖洗色譜柱,以沖掉柱內(nèi)的鹽,然后再用合適的溶劑來(lái)沖洗。
 
  凝膠濾過(guò)色譜法(GelFiltrationChromatography)中所使用的凝膠柱常用緩沖溶液做流動(dòng)相,用完之后當(dāng)然要用蒸餾水來(lái)沖洗。如果是連續(xù)操作,可以將緩沖溶液置于柱內(nèi)過(guò)夜,但較好是維持小流速(<0.5ml/min)以防止緩沖鹽的析出,如果流動(dòng)相中含有鹵化物,即使是停一夜,也必須要用蒸餾水將色譜柱沖洗干凈,以防止它們對(duì)柱體的腐蝕。
 
  4、色譜柱的存放。如果色譜柱暫時(shí)不用,存放時(shí)要注意以下幾點(diǎn):
 
  a.幾天之內(nèi)的短期放置,應(yīng)先用溶劑沖洗好色譜柱(如凝膠柱則用蒸餾水來(lái)沖洗),再把色譜柱的兩頭用密封螺絲密封好即可。
 
  b.如果色譜柱長(zhǎng)期不用,僅用上述方法來(lái)處理就不行了,這時(shí)應(yīng)使用色譜柱使用說(shuō)明書(shū)中所指明的溶劑來(lái)充滿(mǎn)色譜柱,反相柱一般使用甲醇,正相柱則可用正已烷或庚烷,而凝膠柱則不能用水了,因柱內(nèi)如果有微生物的生長(zhǎng)則會(huì)使柱效降低,此時(shí)應(yīng)用0.05%的NaNs水溶液(防腐劑)來(lái)沖洗色譜柱,再將色譜柱封嚴(yán)。色譜柱長(zhǎng)期放置時(shí),一定要將色譜柱的兩端封嚴(yán),以防止由于溶劑揮發(fā)而造成的柱填料干縮現(xiàn)象,因這可導(dǎo)致柱效的嚴(yán)重降低。
 
  c.色譜柱應(yīng)貯存在室溫下,如果放置于0℃以下的環(huán)境里,柱內(nèi)就會(huì)結(jié)冰,這也將導(dǎo)致柱效的降低。
 
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